免疫組化（Elivison二步法） （1）石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時(shí)，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。
（2）取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）
（3）每張切片加1滴3% H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。
（4）除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時(shí)。
（5）PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑（試劑A），室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。
（6）除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物（試劑B），室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’
（7）除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液，顯微鏡下觀察5分鐘。
（8）蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。
注：即用型第二代免疫組化Elivision plus廣譜試劑盒，購(gòu)自福州脈新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。包括：生物素化抗兔二抗、親和素（Reagent A）、生物素－辣根過氧化物酶（Reagent B）、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）
|
