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蛋白質(zhì)變性劑是一類能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性作用的試劑。蛋白質(zhì)變性是指當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)受物理或化學(xué)因素的影響，其分子內(nèi)部原有的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)發(fā)生改變的過程。一般認為蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)有了改變或遭到破壞，都是變性的結(jié)果。

常見的蛋白質(zhì)變性劑有強酸、強堿、重金屬鹽、丙酮、尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍等。在生化實驗中，常需要對蛋白質(zhì)進行變性研究，一般我們常用尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍這三種蛋白質(zhì)變性劑。今天我們就來講講這三種蛋白質(zhì)變性劑的優(yōu)缺點、區(qū)別、變性機制和注意事項等內(nèi)容。

尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的優(yōu)缺點：

尿素的溶解能力和變性能力相對較弱，但具有不電離、呈中性、成本低、蛋白質(zhì)復(fù)性后不會造成大量蛋白質(zhì)沉淀等優(yōu)點。

鹽酸胍的溶解能力和變性能力相對較強，但成本比尿素高、在酸性條件下易產(chǎn)生沉淀、可能對蛋白質(zhì)離子交換色譜有干擾等缺點。

異硫氰酸胍的溶解能力和變性能力是這三種蛋白質(zhì)變性劑中強的，同時也是最貴的。

尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的區(qū)別：

濃度：在室溫下，4~6mol/L尿素和3~4mol/L鹽酸胍，可使球狀蛋白質(zhì)從天然狀態(tài)轉(zhuǎn)變至變性狀態(tài)的中點，通常增加變性劑濃度可提高變性程度，一般來說8mol/L尿素和6mol/L鹽酸胍可以使蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樽冃誀顟B(tài)。不過也有一些球狀蛋白質(zhì)，甚至在8mol/L尿素和6mol/L鹽酸胍溶液中也不能變性，然而繼續(xù)提高溶液濃度，在8mol/L鹽酸胍溶液中，蛋白質(zhì)一般以無規(guī)則卷曲（變性）構(gòu)象狀態(tài)存在。

溶解度：尿素溶解能力較鹽酸胍慢而弱，鹽酸胍溶解能力較異硫氰酸胍慢而弱。尿素的溶解度為70%~90%，它在作用時間較長或溫度較高時會裂解形成氰酸鹽，對重組蛋白質(zhì)的氨基進行共價修飾；鹽酸胍溶解能力達95%以上，且溶解作用快而不造成重組蛋白質(zhì)的共價修飾。